利用

ELISA 的基礎是抗原或抗體的固定化和抗原或抗體的酶標記。固相載體表面結合的抗原或抗體仍保留其免疫活性，而酶標抗原或抗體同時保留其免疫活性和酶活性。在測量過程中，測試樣品（其中的抗體或抗原）與固體支持物表面的抗原或抗體發(fā)生反應。在固相載體上形成的抗原抗體復合物通過洗滌與液體中的其他物質分離。然后添加酶標記的抗原或抗體，并在整個反應過程中與固體支持物結合。此時，固相上的酶量與樣品中分析物的量成正比。加入酶促反應的底物后，底物被酶的有色產物催化，產物的多少與樣品中分析物的量直接相關，可進行定性或定量分析。關于顏色深度。由于酶的高催化效率，間接放大了免疫反應的結果，并且該測定達到了高靈敏度。 ELISA可用于測量抗原和抗體。

Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

中文名ELISA 試劑盒

外文名ELISA Kit

問世時間60-70年代

特點試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便

ELISA試劑盒在國內有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發(fā)展。

操作方法

雙抗體夾心法

1. 包被：以 0.05 MPH 稀釋抗體至蛋白質含量為 1-10 μg/ml。 9.含氧碳酸鹽涂層緩沖液。在 4°C 下將 0.1 ml 添加到每個聚苯乙烯板的反應孔中過夜。次日，棄孔中溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次，每次3分鐘。 （以下也稱為清掃）。

2、加樣：向上述包被好的反應液中加入0.1ml的特定稀釋待測樣品，37℃孵育1小時。然后洗。 （同時創(chuàng)建空白孔、陰性對照孔和陽性對照孔）。

3. 酶標抗體的加入：每個反應孔中加入新鮮稀釋的酶標抗體（滴定后稀釋）0.1ml。在 37°C 下孵育 0.5-1 小時并洗滌。

4、加入底物溶液顯色：在每個反應孔中加入0.1ml臨時配制的TMB底物溶液，37℃孵育10-30分鐘。

5. 反應結束：向每個反應孔中加入 0.05 ml 2M 硫酸。

6、結果的判斷：在白色背景上可以用肉眼直接觀察結果。反應孔越深，陽性反應越強，陰性反應無色或非常淺。表示“-"符號。您還可以測量 OD 值。用ELISA檢測器在450nm（ABTS顯色時為410nm），用空白對照孔調零，如果大于OD值的2.1倍，測量各孔的OD值。的陰性對照為陽性。

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